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本产品是用于外泌体核酸（DNA和RNA）纯化试剂盒。


外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(40～100nm)。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。

• 一管式操作，在同一试管中完成，减少样品丢失。
  
• 沉淀法，不使用离心柱，能有效避免小RNA的丢失。
  
• 能同时提取RNA（包括RNA和miRNA）和DNA。
  
• 回收率达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
  
• 无毒环保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。
  
• 本产品只能用于科研，不能用于临床。

组分	规格
外泌体核酸提取溶液A	30mL
外泌体核酸提取溶液B	35mL
外泌体核酸提取溶液C	50mL
RNase-free水	1mL

保存：RT，有效期一年，外泌体核酸提取溶液A长期保存需要置于4℃。


一、备外泌体
本试剂盒不提供外泌体提取的相关试剂，自备的外泌体需要立即使用或放-80℃长期保存。用于核酸提取的外泌体可以是沉淀，也可以是重悬液。

二、外泌体核酸提取

• 从冰箱取出外泌体核酸提取溶液A放室温或握在手上融化，直到没有任何晶体。
  
• 标记1.5～2mL螺旋盖塑料离心管，为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。最好在每个管盖上做个标记，以在下步离心时有意将标记方向朝向心面或离心面。
  
• 将不超过200μL的外泌体重悬液加入到标记好的塑料离心管中。
  
• 每管中加入600μL外泌体核酸提取溶液A，盖上盖子后振荡数秒混匀。
  
• 室温放置3分钟。
  
• 加入0.7mL外泌体核酸提取溶液B，旋紧盖后振荡30秒混匀。
  
• 14000g室温离心至少15分钟。注意：离心时如果把标记固定朝向心面或离心面，则在后面的操作均得按此朝向进行离心。
  
• 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的核酸沉淀（此时可能看不见）。
  
• 加入1.0mL外泌体核酸提取溶液C，振荡数秒.
  
• 14000g室温离心5分钟。注意：离心管标记的朝向要跟上面的一致。
  
• 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的核酸沉淀（可能在离心管内壁的离心面呈膜状）。
  
• 再短暂离心数秒，用移液器移弃残留液体（约50μL）。
  
• 加入200μL RNase-free水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状沉淀。如果溶液稍呈混浊状属于正常。
  注意：所得溶液即为外泌体核酸溶液。如果只需要RNA，必须去除DNA，则另外用自备的RNase-free DNase对DNA污染进行降解。反之如果只需要DNA，必须去除RNA，则另外用自备的DNase-free RNase对RNA污染进行降解。
  
• 直接取适量用于后续实验。样品可以室温放置2小时，也可保存于-80℃保存一个月。

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